某些低聚木糖的毒性试验研究

作者:黄明文 来源:推广部 时间:2019-10-08 15:42

低聚木糖在低聚糖中占据重要位置。首先,它的有效剂量在许多低聚糖中非常低。就双歧杆菌的增殖而言,其有效摄入量为0.7g /人和日本,1/20的低聚异麦芽糖,1/10的低聚果糖,1/7的低聚半乳糖;近年来我国刚刚出现了中国低聚木糖的研究与开发[2]。我们对其中一种具有通便作用的低聚糖片进行了毒理学安全性评价。结果表明,该产品的急性毒性试验无毒,Ames试验,小鼠骨髓多色红细胞微核试验,小鼠精子畸形试验无遗传毒性,大鼠30天喂养试验表明,每个实验动物均在集团有良好的增长和发展,所有指标都在房间的正常范围内。两组和对照组之间无显着差异。组织病理学检查未发现异常。该样品对大鼠观察指标无明显毒副作用,食用该产品安全可靠。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1低聚木糖片由生物技术公司提供。

1.1.2实验动物清洁级昆明小鼠和清洁级Wistar大鼠由中国军事医学科学院实验动物中心提供,证书编号为SCXK-(军)2002-001。

1.1.3 Ames实验菌株由山东省医学科学院劳动卫生与职业病研究所提供。

某些低聚木糖的毒性试验研究

1.2方法[1]

1.2.1小鼠急性毒性试验选择20只小鼠,10只雄性和10只雌性,体重18-22g。剂量为10g/kg.bw,通过强饲法给予试验物质,胃灌注量为0.2ml/10g.bw。观察14天后,记录动物中毒表现和死亡。

1.2.2 Ames试验试验菌株被鉴定为适合于鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷菌株TA97,TA98,TA100,TA102,而体外活化系统是由多氯联苯衍生的大鼠肝匀浆制备的S-9混合物。根据毒性测定结果,实验建立了5个剂量的200,500,1000,2500,5000μg/皿,并建立了自发恢复组,溶剂对照组和阳性对照组。在添加S-9和不添加S-9混合物的条件下,根据板掺入法进行测试,并且每个板设置有3个板。如果测试物质的集落数超过自发回复集落数的两倍并且具有剂量 - 反应关系,则判断为阳性。在相同条件下重复整组测试两次。

1.2.3小鼠骨髓多色红细胞微核试验将50只体重25~30g的小鼠随机分为5组,每组10只,雌雄各半。三个实验组的受试者的剂量分别为2.5,5.0和10.0g/kg.bw,并且另外提供蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组(40mg/kg.bw)。以24小时的间隔通过管饲法给予试验物质两次,并在最后一次给予试验物质后6小时处死动物,并常规制备片剂。检查每只动物的1000个多色红细胞,记录微核细胞的数量,并计算微核率(以千分之几表示)。

1.2.4小鼠精子畸形试验将25只体重25-30g的雄性小鼠随机分成5组。每组5人。三个实验组的受试者的剂量分别为2.5,5.0,10.0g/kg.bw,并且蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组(40mg/kg.bw)口服给药。测试文章不断。在第一次强饲后第5天,将动物处死5天并常规制备。对每只动物计数1000个结构完整的精子,记录扭曲的类型和数量,并计算精子畸形率(表示为百分比)。

1.2.5大鼠30天喂养试验

1.2.5.1试验方法选用体重60~80g断乳大鼠80只,随机分为4组,每组20只,雌雄各半。根据人体推荐量设立3个实验组,受试物剂量分别为0.65、1.30、2.60g/kg.bw(分别相当人推荐量的25、50、100倍),将受试物按照动物体重的10%计算食物摄入量掺入饲料中给予实验动物,即0.65%,1.30%,2.60%(质量分数)。对照组喂饲基础饲料。单笼喂养,自由饮食,每周称重,记录饲料加入量、剩余量,连续观察30天。第30天禁食16h,第31天处死动物,取血进行血常规及血生化测定。

1.2.5.2观察指标(1)动物的一般表现、体重、食物利用率。(2)血常规及生化指标血红蛋白、红细胞计数、白细胞总数及其分类、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白等。(3)病理解剖脏器系数、大体观察及病理组织检查(肝、肾、脾、胃及十二指肠,睾丸或卵巢)。

2结果

2.1急性毒性试验灌胃给予受试物后,两种性别的小鼠均未见明显中毒症状,14天内动物无死亡(见表1)。因此认为该受试物对两种性别小鼠的急性毒性LD50均大于20g/kg.bw。根据急性毒性分级标准,该样品属无毒物质。

某些低聚木糖的毒性试验研究

2.2遗传毒性试验

2.2.1Ames试验由表1-1、表1-2可见,两次试验中受试物各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系,说明在加与不加S-9时该样品对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株均未呈现遗传毒性。

2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验由表2可见,受试物各剂量组微核率与阴性对照组之间差异无显著性(P0.05),而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组之间差异有非常显著性(P0.01),说明该样品无致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核产生作用。

2.2.3小鼠精子畸形试验由表3可见,受试物各剂量组小鼠精子畸形率与阴性对照组之间差异无显著性(P0.05),而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组之间差异有非常显著性(P0.01),说明该样品无致小鼠精子畸形作用。表1-1Ames试验结果(第一次)(x±s)

表1-2Ames试验结果(第二次)(x±s)

注(1)疟的平,250μg/皿;(2)正定霉素,50μg/皿;(3)叠氮钠,1.5μg/皿;(4)丝裂霉素,0.5μg/皿;(5)2-氨基芴,50μg/皿;(6)1,8-二羟基蒽醌,50μg/皿

表2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果

注**P0.01(与阴性对照组比较,Poisson分布检验)

表3小鼠精子畸形实验结果

注**P0.01(与阴性对照组比较,χ2检验)

2.3大鼠30天喂养试验

2.3.1动物的一般表现、体重、食物利用率实验中各实验组动物均未出现拒食现象,生长活动正常,体重和食物利用率结果分别见表4和表5。从表中看出各实验组动物体重与对照组之间无显著性差异,各实验组动物进食量、食物利用率与对照组之间差异亦无显著性(P0.05)。

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